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诺丽调节代孕女性月经周期不良症状

发布时间:2017-03-17 11:31:12

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  诺丽果中的具有微弱的雌激素活性。食用诺丽不会引起身体上的问题,然而,长期服用诺丽可以调节代孕女性月经周期的不良症状(60ML/天)原理如下:

  摘要海巴戟(诺丽)有助恢复正常月经周期并减轻经期症状,本研究首次采用体内试验检测其雌激素活性,并验证诺丽提取物的有益效果是否通过雌激素作用而实现的。实验采用子宫增重法,同时青春期前的小鼠皮下注射不同剂量的诺丽水提取物和乙醇提取物,对照组注射17p-雌二醇,持续3天。注射诺丽的小鼠阴道口张开和阴道口角质化的频率不同于对照组。

  1 引言

  海巴戟在泰国又称诺丽或Nhau,其果实在许多全球各地的热带地区被当作一种食物(Mc-ClatchevW,2002),且据称诺丽果有诸多保健功能,如缓和月经症状等(www.hawaiiannoni.com/noni/benefits)。近年来,对于诺丽的研究越来越多,并阐述诺丽可产生一些生物效应(WangMY等,2002),而且其中含有多种生物学活性成分,包括23种植物素,5种维生素,3种矿物质(Duke,1992)。雌激素类化合物能显著改善人和动物的生殖系统和内分泌系统(Herbst等,1981)。有研究显示服用诺丽后绝经妇女出现了阴道出血的症状(数据未发表),同时对国际诺丽通讯委员会(INCC)注册的客户进行问卷调查后,结果显示服用诺丽可有助于绝经前妇女恢复正常月经周期(www.incc.org)。

  雌激素是一种类囤醇激素,其在调控代孕女性生理方面发挥重要功能。目前已有多种植物激素经验证可与雌徼素受体结合并产生雌激素效应(Davis等1999)。据报道诺丽果实含有黄酮糖苷(Wange等2002),经结构分析该成分属于一种植物激素(Cos等2003)。虽然与内源性或合成类固醇相比,植物雌激素与雌激素仅一受体结合时较温和,但其对雌激素靶器官来说也提供了更多的选择。

  目前诺丽在全球范围内已被广泛使用,鉴于雌激素替代疗法理论的风险性,对诺丽中的雌激素特性进行研究非常必要。对于普通使用者来说,诺丽水提取物较为常见,然而乙醇提取类固醇效果更好,因此需对诺丽水提取物及乙醇提取物同时检测。

  尽管体外实验能揭示各成分之间的交互作用,但体外实验并不能完全复制体内众多药物代谢和药效之间的相互作用,依靠体外实验预测体内干扰作用可能会产生假阳性和假阴性结果。因此,必须通过体内实验来验证体外实验产生的假说(JosephCV,2003)。体内实验研究表明3天子宫增重法是研究雌激素活力的一种有效方法(Laws等2000)。本研究采用该方法研究诺丽中的雌激素活性。

 2 材料和方法

   样品和雌激素标品的准备

  新鲜未成熟的诺丽果实采自泰国农村集中地区。果实切片后60℃下干燥、研磨互粉状。称取200g干燥粉末溶于300mL蒸馏水中,煮沸30min。将过滤后的上清液冷冻干燥处理,最终得到水萃取液的固体残余物。

  称取800g干燥粉末于抽气容器中,日间使用95%乙醇浸泡8-9h,次日上午,向粉末中加入重新力Ⅱ人酒精。将收集到的提取物通过旋转蒸发仪进行浓缩(BuchiLaboratoryTechniquesLtd.,Flawil,Switzerland),浓缩物4℃储存。同样步骤重复5天,共使用乙醇3000mL。

  新鲜诺丽水和乙醇提取率分别是%和%。使用前,将提取物的浓缩物溶解到适当溶剂中一常温无菌水(ThaiOtsukaPharmaceutical.,Bangkok,Thailand)或者玉米油(C63156,Fluka,NY,USA)中。

  标准溶液:17β雌二醇(E8875,Sigma公司)溶于乙醇(Merck,Darmstadt,Germany)中,终浓度为10μg/mL,4℃储存。实验当天,制标准溶液,液氮干燥,动物注射前将其溶解于玉米油中。

   实验动物

  2ld大小的未成熟雌性小鼠(InternationalCancerResearchstrain,Japan)来自泰国国家实验动物中心。实验前小鼠体重控制在12-2lg之间。这些小鼠随意进食丸状食物及水(C,P.MiceFeed,Bangkok,Thailand)。饲养环境:温度在23-27度,湿度在50-80%,12h光照、12h黑暗。

   急性毒性实验

  通过腹腔注射法测定诺丽果提取物的LD50,每个剂量3-5只小鼠(LorkeD,1983;NakanishiKetⅡZ一1965)。单次剂量注射之前,将诺丽水及乙醇提取物分别溶解到蒸馏水和阿拉伯树胶中,按照小鼠体重换算出需注射量。LD50通过计算注射诺丽提取物72h后死亡数得出。

  子宫增重生物测定

  将未成年老鼠分组,每组8-10只,分别注射不同剂量的17β雌二醇((,,,,和mg/g))、诺丽水提取物(50,100,200,400,800和1600mg/g)、诺丽乙醇提取物(10,15,40,,175,375,750,1500和3000mg/g),连续3天。对照组按同样方式注射蒸馏水或玉米油,据报道玉米油不会改变动物的体重、性器官及附属性器官的重量,适合用于子宫增重试验。(YamasakiK等,2001)。实验第一天、第四天记录小鼠体重,最后用乙醚处死小鼠,取出子官,去除子宫上附着的脂肪,注意保留子宫腔液。擦干子宫表面的液体,使用史密斯滚转扭秤(Roller-Smithtorsionbalance)测量子宫的干重和湿重(FederalPacificElectricCo,NJ,USA)。同时检测阴道张开和阴道细胞。

  为确保实验的准确性,制定雌激素和诺丽提取物的标准曲线重复2-3次,并且选择使子宫增重最多的剂量作为实验剂量。雌激素相对活力通过与(×l0-5nm)雌二醇产生的子宫增重相比计算得出。

  数据分析

  应用非参数K-S检验法(版本的sp。。软件)对数据进行统计分析。试验组和对照组的子宫干重、湿重以及相对干重、相对湿重的差异显著性比较,采用方差分析(ANOVA)或者t一检验和Kruskal-Wallis检验或者Mann-Whitney检验。不同组间阴道张开频率和细胞角质化的比较采用卡方检验。显著性均在P<下测定。

  表示相对于对照组小鼠的子宫相对干重和相对湿重百分比

  B、D表示相对于小鼠自身体重的子宫相对干重和湿重百分比

  数据=平均值+标准差

  (E2:雌二醇,MALC:诺丽水提取物,MDW诺丽乙醇提取物,*P<.*P<)

  图1 未成年老鼠的子宫增重结果

  表1 两个诺丽组和雌二醇组小鼠的阴道张开频率

%Vaginalopening

pvalue

Yes

No

Com oil

<

Estradiol

Com oil

Noni:alcohol extract

Com oil

Noni:aqueous extract

 3 结果

  诺丽水提物和乙醇提取物的LD;。

  通过腹腔注射,诺丽水提物和乙醇提取物的LD50分别是7500和3500mg/kg体重。

 诺丽水提取物的子宫增重作用

  与玉米油对照组相比,雌二醇浓度在以上能引起显著的子宫增重(见图1)。而所有剂量的诺丽水提物和乙醇提取物均未引起显著的子宫增重(见图1)。子宫的干、湿重量测定方法类似。

  图1中的表示相对于体重的相对子宫重量,与诺丽水提取物和对照组相比,诺丽乙醇提取物在浓度为10pg/g(干重和湿重)时能引起显著的子宫增重,水提物浓度只有在达到100mg/g才出现明显的子宫增重,增重百分比为26450%。高剂量的诺丽提取物不会引起子宫增重。

  图2 100μg/g诺丽水提物和10μg/g诺丽乙醇提取物(相比于0.01μg/g雌二醇)对子宫相对相对下重和湿重(相对于体重)的影响(平均值+标准差)

表2 两个诺丽组和雌二醇组小鼠的角质化细胞检测

%Cornified

cellsositive

pvalue

Com oil

0

<

Estradiol

Com oil

Noni:alcohol extract

Com oil

Noni:aqueous extract

  图2表示各种剂量下与17-β雌二醇相比,提取物可引起最大子宫增重(见图1)。诺丽水提物和乙醇提取物的雌激素活力分别是雌二醇的1/10000和1/1000。

  注射雌二醇的小鼠阴道张开频率超过99%,而对照组仅为20%(见表1)。与实验组比较,对照组小鼠的阴道张开频率十分低。阴道角质化上皮细胞检测(测定雎激素活力的另一指标)结果显示只有雌二醇才能引起显著的角质化现象。  

 3讨论

  急性毒性试验是研究任何物质的生物学功能的第一步。诺丽水提物和乙醇提取物的LD50分别是7500和3500mg/kg(通过腹腔注射)。Nakanishi组采用相同的方法测定了4周大的小鼠的LD50,其结果(LD50>lOOOmg/kg)与本研究一致。提取物的制备、小鼠种类、小鼠年龄上的不同都会导致测量值的微小差异。子宫的干重和湿重、阴道张开的直径和阴道上皮细胞的角质化是测定雌激素的可靠方法(Diel等,2002;Laws等,2000;Jefferson等,2002)。雌激素活性增加的早期标志是由微血管渗透性增加而导致的子宫水吸性增加,这可通过水分增加量测定。小鼠子宫增重试验是在小鼠接触到化学品后直接测量子宫的干重、湿重增加量(Marky等,2001)。然而,有科学家提出有丝分裂是测量雌激素活性的最适指标(Hertz,1985;Marky,2001)。因此,能够刺激女性生殖道中有丝分裂的物质也具有雌激素活力,而在诺丽提取物的子宫增重试验中并未表现出这些特性。然而,注射低剂量诺丽提取物的小鼠的平均子宫增重比对照组要高出许多。小鼠子宫相对干重和相对湿重增加不同,表明诺丽的雌激素活性是由水吸性和子宫织有笪分裂共同作用的。

  综上所述,诺丽果中的具有微弱的雌激素活性。食用诺丽不会引起身体上的问题,然而,长期服用诺丽可以调节女性月经周期的不良症状。

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